Die Lebensfähigkeit des Testorganismus Brevundimonas diminuta (ATCC 19146) wird durch direkte Inokulation in das Testprodukt und die Simulanzflüssigkeit (auch bekannt als Surrogat) (falls erforderlich) für eine Expositionszeit gleich oder länger als die maximale Filtrationszeit des Prozesses bewertet. Die Waschverfahren für die Filterkapseln und/oder Test- oder Rückgewinnungsmembranen, die während der bakteriellen Challenge-Studie verwendet werden, werden ebenfalls untersucht und validiert.
Die Testmethode (Viabilität) basiert auf den im Technischen Bericht Nr. 26 der Parenteral Drug Association (PDA) beschriebenen Grundsätzen.
Die Viabilitätsergebnisse werden verwendet, um die am besten geeignete Methode für die Durchführung des bakteriellen Provokationstests zu bestimmen, basierend auf den folgenden Definitionen oder Klassifizierungen des zu untersuchenden Arzneimittels:
Nicht bakteriell
Eine Abnahme der Lebensfähigkeit von Mikroorganismen von weniger als einem log über die Dauer des Tests für die Dauer der Prozesszeit definiert das Produkt als nicht bakterizid.
Mäßig keimtötend
Eine Abnahme der Lebensfähigkeit von Mikroorganismen von weniger als einem log über 60 Minuten und 1 log oder mehr über die Dauer der Prozesszeit definiert das Produkt als mäßig bakterizid und kann eine bakterielle Herausforderung durch Inokulation des Mikroorganismus innerhalb des Produkts für eine kurze Zeit erlauben, nachdem der Mikroorganismus im Challenge-System rezirkuliert wurde, aber ohne Inokulation.
Bakterizid
Das Produkt gilt als bakterizid, wenn die Lebensfähigkeit der Mikroorganismen über einen Zeitraum von mindestens 60 Minuten um mehr als einen log abnimmt.
Zweck der Bakterienrückhaltestudie ist der dokumentierte Nachweis, dass das Filtrationsverfahren einen sterilen Abfluss erzeugt und eine hohe Menge eines Standardbakteriums, das in die Arzneimittelformulierung oder die Ersatzflüssigkeit beimpft wurde, unter den ungünstigsten Betriebsbedingungen reproduzierbar entfernt. Die bakterielle Challenge-Studie wird mit einem Standardbakterium durchgeführt, das der Arzneimittelformulierung unter den ungünstigsten Bedingungen beimpft wird, und berücksichtigt die Angaben in der Standardmethode der American Society for Testing and Materials (ASTM) für die Qualifizierung von Membranfiltern mit mikrobieller Retention und die Richtlinien des PDA Technical Report Nr. 26.
Die drei Testfilter oder zumindest eine der verwendeten Membranchargen sollten einen Vorgebrauchsintegritätstestwert aufweisen, der der Prüfspezifikation des Filterherstellers entspricht oder nahekommt. Wenn dies nicht möglich ist, sollten die Testmembranen aus einer Produktionscharge ausgewählt werden, deren Vorgebrauchsintegritätstestwerte so niedrig wie möglich sind. Eine vierte Linie wird mit einer Kontrollfiltermembran (0,45 μm) bestückt, die aus demselben Filtermedium besteht wie die Testmembranen. Am Ende der Testphase wird das gesamte Testabwasser über die Rückgewinnungsfiltermembranen gesammelt und das entsprechende Spülverfahren angewendet. Zu Beginn und am Ende des Tests wird die aerobe Gesamtkeimzahl (Total Viable Aerobic Count, TVAC) des Challenge-Inokulums bestimmt.