La viabilidad del organismo de prueba Brevundimonas diminuta (ATCC 19146) se evalúa mediante inoculación directa en el producto de prueba y en el fluido simulante (también conocido como sustituto) (si es necesario) durante un tiempo de exposición igual o superior al tiempo máximo de filtración del proceso. También se estudian y validan los regímenes de lavado de las cápsulas filtrantes y/o de las membranas de prueba o de recuperación utilizadas durante el estudio de desafío bacteriano.
El método de ensayo (Viabilidad) se basa en los principios descritos en el Informe Técnico nº 26 de la Parenteral Drug Association (PDA).
Los resultados de la viabilidad se utilizan para determinar el método más adecuado para realizar la prueba de provocación bacteriana, basándose en las siguientes definiciones o clasificaciones del medicamento investigado:
No bacteriano
Una disminución de la viabilidad de los microorganismos inferior a un log a lo largo de la duración de la prueba durante el tiempo del proceso define el producto como no bactericida.
Moderadamente bactericida
Una disminución de la viabilidad de los microorganismos de menos de un logaritmo en 60 minutos y de 1 logaritmo o más durante todo el proceso define el producto como moderadamente bactericida y puede permitir una provocación bacteriana inoculando el microorganismo dentro del producto durante un breve período de tiempo, tras la recirculación del microorganismo en el sistema de provocación pero sin inoculación.
Bactericida
Una disminución de la viabilidad de los microorganismos de más de un log durante un período mínimo de 60 minutos define el producto como bactericida.
La finalidad del estudio de retención bacteriana es disponer de pruebas documentadas de que el proceso de filtración generará un efluente estéril y eliminará de forma reproducible un nivel elevado de una bacteria estándar inoculada en la formulación del medicamento o en el fluido sustitutivo en las peores condiciones de funcionamiento. El estudio de desafío bacteriano se realiza utilizando una bacteria estándar inoculada en la formulación del fármaco en las peores condiciones y tiene en cuenta las indicaciones dadas en el Método Estándar para la Calificación de Filtros de Membrana de Retención Microbiana de la Sociedad Americana de Pruebas y Materiales (ASTM) y las directrices del Informe Técnico nº 26 de la PDA.
Los tres filtros de prueba, o al menos uno de los lotes de membranas utilizados, deben tener un valor de prueba de integridad física previo al uso igual o cercano a la especificación de prueba del fabricante del filtro. Cuando esto no sea posible, las membranas de prueba deberán seleccionarse de un lote de producción cuyos valores de prueba de integridad previa al uso sean lo más bajos posible.
Se monta una cuarta línea con una membrana filtrante de control (0,45 μm) que consiste en el mismo medio filtrante que las membranas de prueba. Al final de la fase de prueba, se recoge todo el efluente de la prueba a través de las membranas filtrantes de recuperación y se aplica el régimen de lavado adecuado. Al principio y al final de la prueba, se realiza un recuento aeróbico viable total (TVAC) del inóculo de desafío.
